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《动物细胞融合与单克隆抗体》学案

目标导航
1.掌握动物细胞融合的原理和方法。
2.结合图2－24，归纳单克隆抗体的制备过程及应用。
重难点击　
1.动物细胞融合的原理和方法。
2.单克隆抗体的制备过程。
知识梳理
一、动物细胞融合
1.概念：________或________动物细胞结合形成____________的过程，也称细胞杂交。
2.原理：________________。
3.诱导融合的方法
(1)物理、化学方法：与植物体细胞杂交相同，如聚乙二醇、电激等。
(2)生物方法：____________。
4.过程：具有不同____________的两个或多个细胞　________细胞。
5．结果：形成________细胞。
6．意义：突破了____________方法的局限，使____________成为可能。成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和________________等的重要手段。如：利用________________，为制造单克隆抗体开辟了新途径。
二、单克隆抗体的制备
1．抗体的传统获得
(1)方法：①向动物体内反复注射某种________，使动物产生抗体；②从动物血清中分离所需________。
(2)缺陷：________、纯度低、____________。
2．单克隆抗体的制备
(1)制备原理
①B淋巴细胞特点：一种B淋巴细胞产生一种单一抗体，B淋巴细胞在体外________(能/不能)无限增殖。
②骨髓瘤细胞特点：能无限增殖。
③杂交瘤细胞特点：B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到杂交瘤细胞，既能____________，又能产生特异性抗体。
(2)制备过程
制备特异性B淋巴细胞②从小鼠中获取相应B淋巴细胞①向小鼠注射特定
　
获得杂交瘤细胞该杂种细胞既能　又能产生　②用特定的选择培养基筛选出　，
　
______培养和______检测
　
将杂交瘤细胞在______培养或注射到小鼠______中增殖
　
提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取
(3)单克隆抗体优点：______________、并可大量制备。
(4)单克隆抗体的应用
①作为诊断试剂，具有准确、______、简易、______的优点。
②用于治疗疾病和____________。
合作探究
1．关于动物细胞融合过程与结果的思考：
(1)动物细胞融合完成的标志是什么？
(2)动物细胞融合与植物原生质体融合所用的诱导方法有何不同？
　
(3)细胞融合技术与有性杂交相比有哪些优点？
　
　
2．动物细胞融合与植物体细胞杂交的对比
比较项目
植物体细胞杂交
动物细胞融合
原理
细胞膜的流动性、细胞的全能性
__________
细胞融合方法
用__________酶去除细胞壁后诱导原生质体融合
用____________酶使细胞分散后，诱导细胞融合
诱导手段
离心、电激、振动、聚乙二醇等诱导
与植物体细胞杂交相比，还可用__________诱导
结果
形成__________
形成__________，以生产细胞产品
用途
克服远缘杂交不亲和的障碍，扩展杂交亲本范围，培育新品种
制备________________、病毒疫苗、干扰素等
意义
突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能
3．仔细观察教材P53图2－24，探讨下列问题：
(1)制备单克隆抗体过程中的几种细胞有何特点？
　
　
(2)单克隆抗体制备过程中有两次筛选，其目的分别是什么？
　
　
4．用单克隆抗体及相关物质制成的“生物导弹”中真正起治疗作用的物质是什么？
　
课堂小结：

扩展阅读

高二生物教案：《动物细胞融合与单克隆抗体》教学设计

一名合格的教师要充分考虑学习的趣味性，教师要准备好教案，这是教师需要精心准备的。教案可以让学生能够在课堂积极的参与互动，帮助教师能够更轻松的上课教学。怎么才能让教案写的更加全面呢？下面是小编精心为您整理的“高二生物教案：《动物细胞融合与单克隆抗体》教学设计”，欢迎大家阅读，希望对大家有所帮助。

2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体

一、学习导航

1、知识网络

2、学习目标

举例说出动物细胞融合和单克隆抗体的原理和应用

3、重难点

单克隆抗体的制备过程

二、自学评价

（一）动物细胞融合

1、动物细胞融合概念：_____或_____动物细胞结合形成________的过程，也成细胞杂交。

2、杂交细胞：_______________________________________________

3．动物细胞融合原理：

4．诱导动物细胞融合的方法：

常用的诱导因素有________（PEG）、________、_____。

※灭活病毒诱导细胞融合的原理：病毒表面的_____和一些酶能够与细胞膜上的______发生作用，是细胞________，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，_______打开，细胞发生融合。

※为什么病毒要灭活：________________________________________

5．优点：突破了_______________的局限，是________成为可能。

6．用途：动物细胞融合技术已经成为研究________、________、_____、_______和生物新品种培育的重要手段。

（二）、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较

项目原理融合方法诱导手段用途

植物体细胞杂交

动物细胞融合

（三）、单克隆抗体

1．概念：由单个B淋巴细胞进行无性生殖形成的细胞所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。

2．特点：既能__________繁殖，又能产生______的抗体。

3．单克隆抗体的制备：

第一步：将________注射到小鼠体内进行免疫；

第二步：从该小鼠脾脏中获得能够产生抗体的________细胞，与小鼠的________细胞在________，或聚乙二醇的诱导下融合；

第三步：在特定的________培养基中，筛选出________细胞；

第四步：培养杂交瘤细胞，从中挑选出________的细胞群，继续培养；

第五步：将该杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养或注射到小鼠________内增殖，然后再分离纯化单克隆抗体；

提取单克隆抗体：从培养液或小鼠腹水中提取。

☆在选择培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有________才能生长

☆B淋巴细胞的特点：________，缺点：________

☆骨髓瘤细胞的特点：________。

☆杂交瘤细胞具备具备双亲的遗传物质，不仅能产生________，还能________，能大量产生单克隆抗体。

4．单克隆抗体的应用

⑴．作为诊断试剂：它在多种________及________的诊断和病原鉴定中发挥着重要的作用。

单克隆抗体在诊断的应用上，具有____、______、简易、_____的优点。

⑵．用于治疗疾病和运载药物：运用药物与单克隆抗体连接在一起制成＂生物导弹＂。

人教版高中生物选修三2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体学案

2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体

1．举例说出动物细胞融合技术及其应用。
2．举例说出单克隆抗体技术及其应用。

一、动物细胞融合
1.概念：动物细胞结合形成细胞的过程，也称细胞杂交。
2．过程：含不同DNA的两个或多个细胞――→灭活的病毒PEG，电激细胞。
3．结果：形成细胞。
4．意义：细胞融合技术突破了方法的局限，使成为可能。
二、单克隆抗体
1.传统获得的抗体
(1)方法：①向动物体内反复注射某种，使动物产生；
②从动物中分离所需抗体。
(2)缺点：产量低、纯度低、。
2．单克隆抗体的制备
(1)过程（见教材图解2-24）
(2)杂交瘤细胞的特点：，产生。
(3)单克隆抗体的优点：，，产量大。
3．单克隆抗体的应用
(1)作为诊断试剂，具有准确、、简易、的优点。
(2)用于和。
思考交流
1．动物细胞融合与植物原生质体融合所依据的原理是什么？

2．“生物导弹”中借助于单克隆抗体的导向作用，能将药物定向带入癌细胞内，其中药物的进入是什么方式？为什么？
正误判断
1．动物细胞融合与植物原生质体融合都可以用灭活的病毒促进融合。()
2．制备单克隆抗体时，必需选用免疫过的小鼠。()
3．单克隆抗体具备纯度高、特异性强等特点，在诊断的应用上具有准确、高效、快速的优点。()
4．“生物导弹”杀死癌细胞的同时，对正常细胞也同样有杀伤力。()

一、动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较
比较项目原理方法步骤诱导方法结果用途或意义
动物细胞融合生物膜具有流动性分散成单个细胞后诱导细胞物理方法、
化学方法、
生物方法形成杂交细胞培育杂交细胞或大量获得细胞产物(如制备单克隆抗体)
　植物体细胞杂交生物膜具有流动性；植物细胞具有全能性酶解法去除细胞壁后诱导原生质体融合，形成杂种细胞后培养成杂种植株物理方法、化学方法形成杂种植株克服远缘杂交不亲和障碍

例1　如图所示为细胞融合技术的一些过程：
(1)从A、B细胞到C细胞的过程中，必须用________处理。
(2)若A、B细胞为植物细胞，那么这样的细胞已经用酶降解脱掉了________，这种酶可能是________酶，由此生成的A和B细胞称为________。
(3)若A细胞为骨髓瘤细胞，B细胞为B淋巴细胞，那么D细胞称为________细胞，由D细胞连续分裂产生大量细胞的过程称为________过程。这种细胞既能无限繁殖，又能产生________。
(4)若A为人细胞，B为鼠细胞，并分别用红、绿荧光染料标记细胞膜上的蛋白质，在形成C细胞时，细胞一半发红色荧光，一半发绿色荧光。到D细胞阶段，两种颜色的荧光均匀分布，请解释原因。
(1)诱导剂　(2)细胞壁　纤维素酶和果胶　原生质体　(3)杂交瘤　克隆　特异性抗体　(4)细胞膜上的蛋白质是可以运动的。

二、单克隆抗体的制备
单克隆抗体的制备过程如何？杂交瘤细胞有什么特点？

例2下图表示用生物工程制备人抗A抗体的过程。请回答下列问题。
(1)人的红细胞膜表面有被称为凝集原的特异________；从免疫学角度看，这种凝集原是________。
(2)图中细胞1是小鼠体内注入人A型血红细胞后而获得的________细胞，这种细胞具有产生_________________________________的特点，但难以在体外培养。甲培养皿中培养的细胞2是从患骨髓瘤的小鼠体内获取的骨髓瘤细胞，这种细胞在体外培养时能____________，但不会产生抗体。
(3)为了能充分发挥上述两种细胞各自的特点，经特殊处理，在促细胞融合因子的作用下，使两种细胞发生融合，形成图中的细胞3，这种细胞称为____________。把它在乙培养皿中进行培养，则能产生大量的细胞群，这种方法称为________。
(4)过程①的主要目的是____________________________________。通过过程②或③的培养方法能产生大量__________抗体。
(1)糖蛋白　抗原
(2)B淋巴　单一的抗A抗体(或单一的特异性抗体)　快速大量增殖
(3)杂交瘤细胞　单克隆
(4)筛选出能产生单一抗A抗体的杂交瘤细胞　抗A单克隆本

课堂达标
1．动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是()
A．诱导融合的方法完全相同B．所用的技术手段完全相同
C．所采用的原理完全相同D．都能形成杂种细胞
2．在飞船上，科学家进行了无人搭载的空间动物细胞融合实验。该实验所依据的原理和促进细胞融合的方法分别是()
A．细胞的全能性、灭活病毒诱导融合B．细胞的全能性、电刺激融合
C．生物膜的流动性、灭活病毒诱导融合D．生物膜的流动性、自然融合
3．下列关于单克隆抗体制备过程的叙述，正确的是()
A．制备过程中不需要动物细胞培养技术
B．杂交瘤细胞具有浆细胞与癌细胞的所有特点
C．经选择性培养基筛选出来的杂交瘤细胞即可用于单克隆抗体的生产
D．单克隆抗体制备过程中的细胞两两融合可得到三种融合细胞
4．用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是()
A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞
B．用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞
C．用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠的骨髓瘤细胞融合
D．筛选杂交瘤细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体
5．单克隆抗体技术在疾病诊断和治疗以及生命科学研究中具有广泛的应用。下列关于单克隆抗体的叙述，错误的是()
A．特异性强、灵敏度高
B．与抗癌药物结合可制成“生物导弹”
C．体外培养B淋巴细胞可大量分泌单克隆抗体
D．由效应B细胞与骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞分泌
6．下图表示单克隆抗体制备过程的各阶段图解，请据图回答下列问题。
(1)请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体制备过程的顺序连接起来________________________________________________。
(2)在单克隆抗体制备过程中选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞具有________________、________________的特性。
(3)由图中可以看出，在单克隆抗体制备过程中运用了____________和____________的动物细胞工程技术手段。
课外强化
1．下图是单克隆抗体制备过程示意图，其中①过程注射的物质和A细胞的名称分别是()
A．抗体、T淋巴细胞B．抗原、T淋巴细胞
C．抗体、B淋巴细胞D．抗原、B淋巴细胞
2．单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合后，要用特定的培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是()
①B淋巴细胞　②小鼠骨髓瘤细胞　
③B淋巴细胞自身融合细胞　④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞
⑤杂交瘤细胞
A．①②③④B．①③⑤C．②④D．②③
3．用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是()
A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞
B．用氯化钙作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合
C．筛选杂交瘤细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体
D．该杂交瘤细胞株的增殖方式和产物分别是有丝分裂和单克隆抗体
4．某实验小组做了下图所示的实验研究。下列相关叙述，正确的是()
A．与纤维母细胞相比，过程①形成的诱导干细胞的全能性较低
B．过程②是诱导干细胞的结构和遗传物质发生稳定性差异的过程
C．每个Y细胞只产生一种抗体，故过程③不需用选择性培养基进行筛选
D．过程④产生的单抗，不需细胞膜上载体蛋白的协助就能释放到细胞外
5．以绵羊红细胞刺激小鼠脾脏B淋巴细胞，再将后者与小鼠骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞克隆群，由此筛选出的单克隆杂交瘤细胞所产生的抗体()
A．能识别绵羊整个红细胞
B．只识别绵羊红细胞表面的特定分子
C．能识别绵羊所有体细胞
D．只识别绵羊所有体细胞表面的特定分子
6．单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV—1)可引起水泡性口唇炎。利用杂交瘤技术制备出抗HSV—1的单克隆抗体可快速检测HSV—1。
回答下列问题：
(1)在制备抗HSV—1的单克隆抗体的过程中，先给小鼠注射一种纯化的HSV—1蛋白，一段时间后，若小鼠血清中抗________的抗体检测呈阳性，说明小鼠体内产生了________反应，再从小鼠的________中获取B淋巴细胞。将该B淋巴细胞与小鼠的________细胞融合，再经过筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞，该细胞具有的特点是__________________________。
(2)若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体，可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的________中使其增殖，再从________中提取、纯化获得。
(3)通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种HSV—1蛋白，其原因是该抗体具有__________和________等特性。

动物细胞工程

选修本
第15课时动物细胞工程

知识精讲
一、动物细胞工程常用技术——动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体、胚胎移植、核移植等；技术是其他动物细胞工程技术的基础。
二、动物细胞培养
1．过程：2．应用：①大规模的生产重要价值的蛋白质生物制品②烧伤病人植皮③培养的动物细胞用于检测有害物质④培养正常或病变细胞由于科研（如海拉细胞系）
三、动物细胞融合
1、动物细胞融合相当于植物体细胞杂交的过程。
2、动物细胞融合与植物细胞融合的基本原理同，诱导融合的方法基本相似，只是除法、法外，还用到方法——以作为诱导剂。
四、单克隆抗体
概念：用单个B淋巴细胞进行，也就是通过，形成，这样的就可能产生出化学性质、的抗体——单克隆抗体。
制备：将免疫B淋巴细胞与骨髓瘤进行细胞融合，经过后得到细胞。这种细胞经过后能产生特定。将这样的细胞群在条件下或注射到内增殖，这样就可以获得大量的单克隆抗体了。
应用：①疾病诊断、治疗、预防，与常规抗体相比特异性强、灵敏度高；②治疗癌症——“生物导弹”。

题例领悟
例1．动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是
Ａ．诱导融合的方法完全相同　Ｂ．所用的技术手段完全相同
Ｃ．所采用的原理完全相同Ｄ．都能形成杂种细胞
解析：原理不同，方法和技术手段基本相同，但不完全相同。答案：D
例2．下图可表示细胞融合技术的一些过程，请巨图回答：
（1）若A、B细胞为动物细胞，从A和B细胞到C细胞的过程中，常用作为来诱导融合。
（2）若A、B细胞为植物细胞，那么这样的细胞已经用酶降解脱掉了。这种酶可能是酶，由此生成的A和B细胞称为。
（3）若A细胞为骨髓瘤细胞，B细胞为B淋巴细胞，那么D细胞称为细胞。由D细胞连续分裂产生大量细胞的过程，称为过程。这种细胞既能无限繁殖，又能产生。
解析：略。答案：（1）灭活的病毒诱导剂（2）细胞壁纤维素原生质体
（3）杂交瘤细胞细胞培养单克隆抗体

自我评价
一、选择题
1．用动物细胞培养技术使细胞传到50代以后仍能传下的传代细胞称为
Ａ．原代细胞　Ｂ．传代细胞　Ｃ．细胞系Ｄ．细胞株
2．不能人工诱导原生质体融合的方法是
Ａ．振动　Ｂ．刺激　Ｃ．PEG试剂　Ｄ．重压
3．下列细胞中，不具有细胞全能性特点的细胞是
Ａ．心肌细胞　Ｂ．神经细胞　Ｃ．根的皮层细胞　Ｄ．木质部导管细胞
4．动物细胞融合技术最重要的用途是
Ａ．培养多倍体的经济动物Ｂ．培养具有双亲优良性状的经济动物
Ｃ．制备单克隆抗体　Ｄ．A、B两项
5．关于单克隆抗体不正确的是
Ａ．化学性质单一Ｂ．用有性繁殖获得
Ｃ．特异性强Ｄ．可用于治病、防病
6．能提高良种家畜繁殖能力的细胞工程技术是
Ａ．组织培养　Ｂ．细胞融合　Ｃ．胚胎移植　Ｄ．细胞核移植
7．在动物细胞培养中，所培养的动物细胞大都取自
Ａ．幼龄动物器官Ｂ．老龄动物器官
Ｃ．中年动物器官Ｄ．中年动物器官
二、非选择题
8．如图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌实验方案。回答：
（1）该方案能得到预期效果吗？。原因是。
（2）图中②为过程，常用诱导剂，该细胞继承了。
（3）图中③进行细胞培养，目的是。
（4）图中④的细胞培养，能获得细胞，便于大规模培养。
（5）破伤风杆菌的抗体最终可从和中提取。
（6）该方案的目的是。

自我评价答案
1C2D3D4C5B6C7A8⑴不能没有将抗原注射到小鼠体内⑵细胞融合灭活的病毒双亲的遗传物质⑶挑选出能产生所需抗体的细胞群⑷足够数量的⑸培养液小鼠腹水中⑹制备单克隆抗体

第二节细胞工程简介──动物细胞工程

第二节细胞工程简介──动物细胞工程
教学目标
1．知识方面
（1）动物细胞培养（知道）。
（2）动物细胞融合（知道）。
（3）单克隆抗体的制备及应用（知道）。
2．态度观念方面
（1）初步培养学生勇于探索，不断创新的精神和合作精神。
（2）通过向学生介绍几大动物细胞工程技术的发展动态及一些新的研究成果，使学生明确人们对生命奥秘的揭示愈加广泛和深入，知识不断更新并向前发展。认识到学无止境，形成终生学习的意识。
3．能力方面
（1）在学习动物细胞培养过程中，学生通过阅读、自学、质疑、讨论、训练、总结等环节，逐步提高独立获取知识的能力、逻辑思维能力、分析问题和解决问题的能力。
（2）由植物体细胞杂交技术导出动物细胞融合过程，培养学生的知识迁移能力、思维能力。
（3）让学生尝试设计革克隆抗体的制备过程，指导学生掌握获取知识和探索生物科学的基本方法，使学生了解生物科学认识模式以发展学生的创造性能力。
重点、难点分析
单克隆抗体既是本小节的重点，也是难点内容。
分析：动物细胞工程常用的技术手段有动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体、胚胎移植、核移植等。其中前三大技术为本节教材的主体内容，而胚胎移植、核移植技术以小字科普读物的形式出现，意在使学生在有所侧重的前提下对动物细胞工程发展概况有一个较全面的了解。在教材重点介绍的三大动物细胞工程技术中，动物细胞培养是其他技术（如单克隆抗体、胚胎移植、核移植等）的基础，其价值更多的是通过其他技术成果来体现的。而动物细胞融合技术目前较为成熟的最重要的用途便是制备单克隆抗体。由此可见，单抗技术应属较高层次的动物细胞工程技术。对它的学习有助于学生较深刻地领悟动物细胞工程的真谛，并从两位诺贝尔奖获得者对单抗独具匠心的实验设计中，深刻体会科学态度、科学方法，尤其是创造性的思维品质在科学研究、发明创造中的决定性作用。基于以上认识，单克隆抗体应列为本节的重点内容，同时单克隆抗体技术本身环节多、技术复杂，加之学生对此缺乏必要的感性认识，所以也是本课的难点所在。
教学模式
自学——指导。启发、探究。
教学手段
1．动物细胞培养的自制挂图。
2．动物细胞融合、单克隆抗体制备过程的教学课件。
3．有关克隆羊“多莉”的录像资料。
4．实物投影仪。
课时安排
二课时。
设计思路
1．采用自学、指导模式对动物细胞培养技术进行较深刻、透彻地学习，为学习其他动物细胞工程技术打好基础。
2．教师启发学生回忆植物体细胞杂交过程；通过新旧知识对比，引导学生大胆推测动物细胞融合过程，培养学生知识迁移能力，并通过课件演示全过程，加强直观性，培养学生的观察、思维能力。
3．教师给出资料，引出探究点。学生通过讨论、辩论，设计多种制备革克隆抗体的方案。然后通过观察全过程课件，质疑、释疑（多方向），并由学生概括单克隆抗体的制备工程。
4．胚胎移植、核移植为书中小字内容，以学生自学为主，教师予以适当指导、点拨。
5．以“多莉”羊的培育过程为主线，将动物细胞工程五种技术的知识有机地串接起来，构成完整的知识体系。
重点提示
1．在教学中，应强化学生的主体意识，开发学生的潜能，使学生的个性在共性发展的同时也能协调发展，使知识不单是讲课的内容，考试的内容，而成为有利于学生综合素质全面提高的载体和素材。教师应善于从教材内容和学生心理状态出发，采用多种方法设计富有启发性的问题，创设探索的情境，激发学生思考和探索的欲望，从而达到在获取知识的同时培养他们的多方面能力的目的。
2．适当增加难度，能在教学过程中引起学生适度的认识冲突。前苏联教育家赞可夫就极力主张“高难度原则”，以求得学生在一定困难水平出现认知冲突，增强学生参与讨论的积极性，促进其发展。
3．在教学过程中，适度拓宽教学内容，扩大学生的知识面，开发学生的思维空间，有利于学生发散性思维的培养。
4．根据学生的认知水平和教学内容的难易程度，合理安排教学容量，控制好课堂教学的密度；该讲的要讲深、讲透，并善于从多角度、多层面来挖掘知识的蕴含，从而把握好教学的力度；同时还要注意课堂节奏的急缓、疏密、错落有致。
教学过程

文章来源：http://m.jab88.com/j/47881.html

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