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《微生物的培养与应用》学案

生物选修一第二章微生物的培养与应用教案
★课题目标
（一）知识与技能
了解有关培养基的基础知识；掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术
（二）过程与方法
分析实验思路的确定和形成的原因，分析实验流程，对比前面的实验设计，归纳共性，分析差异，增加印象
（三）情感、态度与价值观
形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神
★课题重点
无菌技术的操作
★课题难点
无菌技术的操作
★教学方法
启发式教学
★教学工具
多媒体课件
★教学过程
（一）引入新课
在传统发酵技术的应用中，都利用了微生物的发酵作用，其中的微生物来自于制作过程中的自然感染。而在工业化生产中，为了提高发酵的质量，需要获得优良菌种，并保持发酵菌种的纯度。这就要涉及到微生物的培养、分离、鉴别等基本技术。现在我们开始学习微生物的培养和应用专题。
（二）进行新课
1．基础知识
1．1培养基的种类包括固体培养基和液体培养基等。
〖思考1〗琼脂是从红藻中提取的多糖，在配制培养基中用作为凝固剂。
培养基的类型及其应用：

1．2培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源四类营养成分。
〖思考2〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？
C、H、O、N、P、S是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97％以上。
碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。
氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。
1．3培养基除满足微生物生长的pH、特殊营养物质和氧气等要求。
生长因子：某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子，如某些氨基酸、碱基、维生素等。
〖思考3〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供糖、维生素和有机氮等营养物质。
〖思考4〗培养乳酸杆菌时需要添加维生素，培养霉菌时需要将培养基pH调节为酸性，培养细菌时需要将pH调节为中性或微碱性。
活动2：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题：
1．4获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。
1．5无菌技术包括：
（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；
（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；
（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；
（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。
1．6比较消毒和灭菌（填表）

〖思考5〗无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是防止感染实验操作者。
1．7消毒方法：
（1）日常生活经常用到的是煮沸消毒法；
（2）对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法（作简要介绍）；
（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒。
（4）实验操作者的双手使用酒精进行消毒；
（5）饮水水源用氯气进行消毒。
1．8灭菌方法：
（1）接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；
（2）玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；
（3）培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。
（4）表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。
〖思考6〗对接种环灭菌时要用酒精灯的充分燃烧层火焰灼烧可能伸入试管或培养皿的部位。
〖思考7〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是避免妨碍热空气流通。
〖思考8〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是有利于锅内温度升高；随后关闭排气阀继续加热，气压升至100kPa，温度为121℃，并维持15～30min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至零时打开锅盖，其目的是防止容器中的液体暴沸。
培养基的配制原则：
①目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。
②营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮比4∶1时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为3∶1时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。
③pH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。
2．实验操作
2．1计算：根据配方比例，计算100mL培养基各成分用量。
2．2称量：准确称取各成分。称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空气中水分。
2．3溶化：①加水加热熔化牛肉膏；②加入蛋白胨和氯化钠继续加热；③加入琼脂；④用蒸馏水定容到100mL。整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。
2．4调pH：用1mol/LNaOH溶液调节pH至偏碱性。
2．5灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用高压蒸汽灭菌锅灭菌；所用培养皿用报纸包扎后用干热灭菌箱灭菌。
2．6倒平板：待培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。
其过程是：
①在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞；
②右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰；
③左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖。
④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。
〖思考1〗锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是消灭瓶口的杂菌，防止杂菌感染培养基。
〖思考2〗倒平板的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。
〖思考3〗若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？
不能。空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。
〖思考4〗配制斜面培养基中，试管要加塞棉塞的目的是保持通气并防止杂菌感染。
〖思考5〗试管培养基形成斜面的作用是增大接种面积。
2．7接种
2．7．1微生物接种的最常用方法是平板划线法和稀释涂布法，另外还有穿刺接种和斜面接种等。
2．7．2平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。其操作步骤是：
①将接种环在酒精灯火焰上灼烧直至烧红。
②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。
③将菌种试管口通过火焰达到消灭试管口杂菌的目的。
④将冷却的接种环伸入到菌液中取出一环菌种。
⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。
⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环伸入平板内划3～5条平行线，盖上皿盖，不要划破培养基。
⑦灼烧接种环，冷却后从第一区划线末端开始向第二区域内划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将第五区的划线与第一区划线相连。
⑧将平板倒置放在培养箱中培养。
〖思考6〗取菌种前灼烧接种环的目的是消灭接种环上的微生物；除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环的目的是消灭接种环上残留菌种；取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是防止高温杀死菌种；最后灼烧接种环的目的是防止细菌污染环境和操作者。
〖思考7〗在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是获得由单个细菌形成的标准菌落。
2．7．3　稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。
2．7．4　系列稀释操作：
①取盛有9mL水的无菌试管6支，编号101、102、103、104、105、106。
②用灼烧冷却的移液管吸取1mL菌液注入编号为101试管中，并吹打3次，使之混匀。
③从101倍液中吸取1mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。
〖思考8〗操作中试管口和移液管应在离火焰1～2cm处。整个操作过程中使用了1支移液管。
3．结果分析与评价
3．1　培养未接种培养基的作用是对照，若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。
3．2　在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。
3．3　培养12h和24h后的菌落大小不同（相同、不同）；菌落分布位置相同（相同、不同）。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大；菌落的位置不动，但菌落数增多。
〖思考9〗在某培养基上出现了3种特征不同的菌落，原因有培养基灭菌不彻底或杂菌感染等。
〖思考10〗频繁使用的菌种利用临时保藏法保存，长期保存菌种的方法是甘油管藏法。前者利用固体斜面培养基培养后，保存在4℃冰箱中，每3～6个月转种培养一次，缺点是保存时间较短，容易发生污染和变异；后者将菌种与无菌体积等量混合后保存在－20℃冷冻箱中。
（三）课堂总结、点评
（四）实例探究
例1．关微生物营养物质的叙述中，正确的是
A.是碳源的物质不可能同时是氮源B.凡碳源都提供能量
C.除水以外的无机物只提供无机盐D.无机氮源也能提供能量
解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于A、B选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；NaHCO3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaCl则只能提供无机盐。对于D选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。
答案：D
例2．下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是
A.防止杂菌污染B.消灭杂菌
C.培养基和发酵设备都必须灭菌D.灭菌必须在接种前
解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。
答案：B
☆综合应用
例3．右表是某微生物培养基成分，请据此回答：
编号成分含量
①粉状硫10g
②（NH4）2SO40.4g
③K2HPO44.0g
④MgSO49.25g
⑤FeSO40.5g
⑥CaCl20.5g
⑦H2O100ml
（1）右表培养基可培养的微生物类型
是。
（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。
如不想浪费此培养基，可再加入，
用于培养。
（3）若除去成分②，加入（CH2O），该培
养基可用于培养。
（4）表中营养成分共有类。
（5）不论何种培养基，在各种成分都溶化
后分装前，要进行的是。
（6）右表中各成分重量确定的原则是。
（7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是。
解析：对于一个培养基，它能培养何种微生物，要看它的化学成分。当然这只适用于合成培养基，如果是一个天然培养基就不能从培养基的成分上区分它是培养何种微生物的。分析化学成分要从营养物质的类型出发。右表中的营养物质有水、无机盐、氮源三类，缺乏碳源和特殊营养物质。对特殊营养物质，有的微生物是不需要的，但没有微生物是不需要碳源的。该培养基中没有碳源，说明培养的微生物是从空气中获得碳源的，即可培养的微生物就是自养型微生物了。该培养基中加入了过量食盐，就可以成为金黄色葡萄球菌鉴别培养基，但金黄色葡萄球菌是异养型微生物，这个培养基就还需要加入有机碳源。该培养基若加入（CH2O），培养基中就有了碳源，但除去成分②，却使培养基中没有了氮源，这时就只能用于培养固氮微生物了。对于菌种鉴定，往往用的是固体培养基，而表中没有凝固剂，需要加入常见的凝固剂——琼脂。
答案：⑴自养型微生物⑵含碳有机物金黄色葡萄球菌⑶固氮微生物⑷3⑸调整pH⑹依微生物的生长需要确定⑺琼脂（或凝固剂）
（五）巩固练习
1．不可能作为异养微生物碳源的是
A．牛肉膏B．含碳有机物C．石油D．含碳无机物
2．根瘤菌能利用的营养物质的组别是
A．NH3，（CH2O），NaClB．N2，（CH2O），CaCl2
C．铵盐，CO2，NaClD．NO2，CO2，CaCl2
3．配制培养基的叙述中正确的是
A．制作固体培养基必须加入琼脂B．加入青霉素可得到放线菌
C．培养自生固氮菌不需氮源D．发酵工程一般用半固体培养基
4．自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是
A．碳源B．氮源C．无机盐D．特殊营养物质
5．下表是有关4种生物的能源、碳源、氮源和代谢类型的概述。其中正确的是()
生物硝化细菌根瘤菌酵母菌谷氨酸棒状杆菌
能源氧化NH3N2的固定分解糖类等有机物光能
碳源C02糖类糖类糖类
氮源NH3N2NH4+、NO3-尿素
代谢类型自养需氧型异养需氧型异养兼性厌氧型自养需氧型
A．根瘤菌、谷氨酸棒状杆菌B．硝化细菌、酵母菌
C．酵母菌、谷氨酸棒状杆菌D．硝化细菌、根瘤菌
6．甲、乙、丙是三种微生物，下表Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在Ⅲ种正常生长繁殖；甲能在Ⅰ中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是（）
粉状硫
10gK2HPO4
4gFeSO4
0.5g蔗糖
10g（NH4）2SO4
0.4gH2O
100mlMgSO4
9.25gCaCl2
0.5g
Ⅰ++++-+++
Ⅱ+++-++++
Ⅲ++++++++
A、甲、乙、丙都是异养微生物
B、甲、乙、丙都是自养微生物、丙是异养微生物
C、甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物
D、甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物
7．微生物（除病毒外）需要从外界吸收营养物质并通过代谢来维持正常的生长和繁殖。下列有关微生物营养的说法正确的是
A．乳酸菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的
B．微生物生长中不可缺少的一些微量的无机物称为生长因子
C．培养基中的营养物质浓度越高对微生物的增殖越有利
D．生长因子一般是酶或核酸的组成成分，微生物本身合成这些生长因子的能力往往不足。
8．某一种细菌株要从环境中提取现成的亮氨酸（20种氨基酸中的一种）才能生长，此菌株对链霉素敏感。实验者用诱变剂处理此菌株，想筛选出表中细菌菌株类型。根据实验年目的，选用的培养基类型是（）
　注：Ｌ—亮氨酸Ｓ—链霉素“＋”—加入“—”—不加入
　如：Ｌ—：不加亮氨酸Ｓ＋：加入链霉素
选项筛选出不需要亮氨酸的菌株筛选出抗链霉素的菌株筛选出不需要亮氨酸的抗链霉素的菌株
ＡＬ＋Ｓ＋Ｌ—Ｓ—Ｌ＋Ｓ－
ＢＬ－Ｓ—Ｌ＋Ｓ＋Ｌ—Ｓ＋
ＣＬ—Ｓ＋Ｌ＋Ｓ＋Ｌ—Ｓ—
ＤＬ＋Ｓ—ｌ—Ｓ—Ｌ＋Ｓ＋
9．要将从土壤中提取的自生固氮菌与其他的细菌分离出来，应将它们接种在
A．加入氮源和杀菌剂的培养基上B．不加入氮源和不加杀菌剂的培养基上
C．加入氮源，不加杀菌剂的培养基上D．不含氮源和杀菌剂的培养基上
10．酵母菌培养液中常含有一定浓度的葡萄糖，但当葡萄糖浓度过高时，反而抑制微生物的生长，原因是
A．碳源供应太充足B．细胞会发生质壁分离
C．改变了酵母菌的pH值D．葡萄糖不是酵母菌的原料
答案：DACACCDBBB
★课余作业
１、收集生活中与微生物有关的实例，并通过所学知识对其进行解释
２、我们打针输液时，首先要用酒精擦拭针刺处，为什么？
★教学体会
本节课可以通过生产实例导入，使学生认识在微生物的培养过程中，保持培养物纯净的重要性。在课堂上可以跳出教材，充分发挥学生的主动性，让学生收集列举更多的生产生活中的实例，从中体会培养物纯净的重要性。当时由于微生物的微观性和危害性，一定要教育学生培养良好的卫生习惯。
★资料袋
微生物的特点
1.个体微小，结构简单
在形态上，个体微小，肉眼看不见，需用显微镜观察，细胞大小以微米和纳米计量。
2.繁殖快
生长繁殖快，在实验室培养条件下细菌几十分钟至几小时可以繁殖一代。
3.代谢类型多，活性强。
4.分布广泛
有高等生物的地方均有微生物生活，动植物不能生活的极端环境也有微生物存在。
5.数量多
在局部环境中数量众多，如每克土壤含微生物几千万至几亿个。
6.易变异
相对于高等生物而言，较容易发生变异。在所有生物类群中，已知微生物种类的数量仅次于被子植物和昆虫。微生物种内的遗传多样性非常丰富。
所以微生物是很好的研究对象，具有广泛的用途。

延伸阅读

《微生物的实验室培养》典型教案分析

俗话说，磨刀不误砍柴工。教师要准备好教案，这是教师需要精心准备的。教案可以让学生们有一个良好的课堂环境，使教师有一个简单易懂的教学思路。写好一份优质的教案要怎么做呢？为满足您的需求，小编特地编辑了“《微生物的实验室培养》典型教案分析”，大家不妨来参考。希望您能喜欢！

《微生物的实验室培养》典型教案分析

·培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。

·培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。在液体培养基中加入凝固剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。

·按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。

·按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。

·培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源（生长因子）等。

·碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。

·氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。只有固氮微生物才能利用N2。

·培养基还要满足微生物生长对PH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件

·无菌技术·获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面：

①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。

②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。

③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。

④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？

答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。

·消毒与灭菌的区别

消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法（对于一些不耐高温的液体）还有化学药剂（如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、紫外线消毒。

灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。

灭菌方法：

①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；

②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；

③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。

④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。

比较项
理化因素的作用强度
消灭微生物的数量
芽孢和孢子能否被消灭
消毒
较为温和
部分生活状态的微生物
不能
灭菌
强烈
全部微生物
能

制作牛肉膏蛋白胨固体培养基

（1）方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。

（2）倒平板操作的步骤：

①将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。

②右手拿锥形瓶，将瓶口迅速通过火焰。

③用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约10～20mL）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。

④等待平板冷却凝固，大约需5～10min。然后，将平板倒过来放置，使培养皿盖在下、皿底在上。

·倒平板操作的讨论

1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？

提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。

2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？

答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。

3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？

答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以防止培养基表面的水分过度地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？

答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。

纯化大肠杆菌

（1）微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。

（2）平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。

（3）稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。

（4）用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是：使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种。

（5）平板划线法操作步骤：

①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。②在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞。

③将试管口通过火焰。④将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液。

⑤将试管通过火焰，并塞上棉塞。⑥左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养皿。⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。⑧将平板倒置放入培养箱中培养。

·平板划线操作的讨论

1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？

答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。

2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？

答：以免接种环温度太高，杀死菌种。

3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？

答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

（6）涂布平板操作的步骤：

①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。②取少量菌液，滴加到培养基表面。

③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8～10s。

④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。

涂布平板操作的讨论

涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？

提示：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。

菌种的保存

（1）对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。

①临时保藏方法

将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入4℃的冰箱中保藏。以后每3～6个月，都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上。

②缺点：这种方法保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异。

（2）对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。

在3mL的甘油瓶中，装入1mL甘油后灭菌。将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在－20℃的冷冻箱中保存。

疑难解答

（1）生物的营养

营养是指生物摄取、利用营养物质的过程。营养物质是指维持机体生命活动，保证发育、生殖所需的外源物质。

人及动物的营养物质：水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类。

植物的营养物质：矿质元素、水、二氧化碳等三类。

微生物的营养物质：水、无机盐、碳源、氮源及特殊营养物质五类。

（2）确定培养基制作是否合格的方法

将未接种的培养基在恒温箱中保温1～2天，无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。

《微生物的实验室培养》教学设计

一名优秀的教师在教学时都会提前最好准备，作为教师就要在上课前做好适合自己的教案。教案可以让学生更好地进入课堂环境中来，帮助教师能够井然有序的进行教学。教案的内容要写些什么更好呢？急您所急，小编为朋友们了收集和编辑了“《微生物的实验室培养》教学设计”，欢迎阅读，希望您能够喜欢并分享！

《微生物的实验室培养》教学设计课题名称课时数说明微生物的实验室培养4配养基的基本知识及配制方法1；配制培养基及倒平板1；纯化大肠杆菌和涂布接种1，观察分析1分离土壤中分解尿素的细菌3基本原理及实验设计1；样品稀释及涂布接种1；对菌落进行统计及实验的分析与讨论1；在第二和第三课时之间需要间隔2天时间分解纤维素的微生物的分离3基本原理及实验设计1；样品稀释及涂布接种1；对菌落进行统计及实验的分析与讨论1；在第二和第三课时之间需要间隔2天时间
提前准备好实验仪器、设备和药品
课题名称实验仪器和设备实验试剂或药品说明微生物的实验室培养培养皿、试管、锥形瓶、量筒、酒精灯、电子天秤、高压蒸汽灭菌锅、移液管、接种环、涂布器、恒温箱、干热灭菌箱、小铁铲等
牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、盐酸、氢氧化钠、琼脂等干热灭菌箱能够迅速地将洗干净的培养皿和试管烘干，小铁铲用于铲土土壤中分解尿素的细菌的分离与计数除配制牛肉膏蛋白胨培养基所需物质外，增加KH2PO4、NaHPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、尿素、酚红等分解纤维素的微生物的分离除配制牛肉膏蛋白胨培养基所需物质外，增加纤维素、NaNO3、Na2HPO47H2O、KH2PO4、KCl、酵母膏、水解酪素、CMC-Na(羧甲基纤维素钠)、土豆汁、刚果红等安排好教学班的实验顺序
微生物实验涉及较多的实验仪器，而且实验时需要课内和课外相结合，如实验室培养需要学生在课堂上完成两项重要的操作步骤，一是配制培养基并倒平板；二是接种操作。平板灭菌工作由于需要较长的时间，因此只能由教师在课间完成。为保证每位学生都能亲手操作，保证各个教学班能在有限时间内完成实验任务，教师要合理安排好教学班的实验顺序。
做好课后的观察与记录
配制培养基和接种操作可以在课堂上完成，但接种后的平板放入培养箱中需要培养2～3天，这期间可安排生物科代表或部分小组长进行定期观察，并做好计录，以便及时让其他学生观察到自己的实验成果。特别需要说明的是，如果学生不能及时观察，培养的时间过长，很多菌落就会联成一片，计数时就无法做到准确有效。
微生物的培养教学设计
教学目标：
（一）知识目标网]
了解有关培养基的基础知识；掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术
（二）能力目标
分析实验思路的确定和形成的原因，分析实验流程，对比前面的实验设计，归纳共性，分析差异，增加印象
（三）情感目标
形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神
教学重点：无菌技术的操作
教学难点：无菌技术的操作
教学过程：
（一）导入
美媒：中国尝试用细菌吃掉大连港漏油
2010年7月29日新闻：上周中国北方大连港两根输油管发生爆炸后，北京一家生物科技公司提供了23吨吃油细菌，用于帮助清理港口周围183平方公里的浮油，此举引起了广泛关注。
微生物作画1微生物作画2
（二）具体过程
知识背景：
1培养基的种类包括固体培养基和液体培养基等。
思考1：琼脂的化学成分是什么？在配制培养基中时的作用是？
培养基的类型及其应用：
标准培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基加入琼脂较多菌种分离,鉴定,计数半固体培养基加入琼脂较少菌种保存液体培养基不加入琼脂工业生产，连续培养化学组成合成培养基由已知成分配制而成，培养基成分明确菌种分类、鉴定天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确工业生，产降低成本目的用途鉴别培养基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别选择培养基添加（或缺少）某种化学成分菌种的分离
2培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源四类营养成分。
思考2：从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？
碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。
氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。
3培养基除满足微生物生长的pH、特殊营养物质和氧气等要求。
思考3：牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么营养物质？
思考4：培养乳酸杆菌时需要添加什么物质？
培养霉菌和细菌时分别需要怎样调节pH？
生长因子：某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子，如某些氨基酸、碱基、维生素等。
阅读无菌技术，讨论回答下列问题：
4获得纯净培养物的关键是什么？
5无菌技术包括哪些？
6比较消毒和灭菌（填表）
比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭消毒较为温和部分生活状态的微生物不能灭菌强烈全部微生物能
思考5：无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是？
7消毒方法：
（1）日常生活经常用到的是煮沸消毒法；
（2）对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法（作简要介绍）；（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶
液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒。
（4）实验操作者的双手使用酒精进行消毒；
（5）饮水水源用氯气进行消毒。
8灭菌方法：
（1）接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；
（2）玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭
菌箱；
（3）培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸
汽灭菌锅。
（4）表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外
灯。
思考6：对接种环灭菌时要用酒精灯的哪一个层火焰灼烧可能伸入试管或培养皿的部位？
思考7：利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的
是什么？
思考8：物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是？
培养基的配制原则：
①目的要明确
②营养要协调
③pH要适宜
实验操作
思考1：锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？
思考2：倒平板的目的是？
思考3：若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？
思考4：配制斜面培养基中，试管要加塞棉塞的目的是？
思考5试管培养基形成斜面的作用是？
补充取菌种前灼烧接种环的目的是消灭接种环上的微生物；除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环的目的是消灭接种环上残留菌种；取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是防止高温杀死菌种；最后灼烧接种环的目的是防止细菌污染环境和操作者。
在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是获得由单个细菌形成的标准菌落。
稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。
系列稀释操作：
①取盛有9mL水的无菌试管6支，编号101、102、103、104、105、106。
②用灼烧冷却的移液管吸取1mL菌液注入编号为101试管中，并吹打3次，使之混匀。
③从101倍液中吸取1mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。
结果分析与评价
1．培养未接种培养基的作用是对照，若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。
2．在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。
3．培养12h和24h后的菌落大小不同（相同、不同）；菌落分布位置相同（相同、不同）。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大；菌落的位置不动，但菌落数增多。
思考1：在某培养基上出现了3种特征不同的菌落，原因有哪些？
思考2：频繁使用的菌种利用临时保藏法保存，长期保存菌种的方法是甘油管藏法。前者利用固体斜面培养基培养后，保存在4℃冰箱中，每3～6个月转种培养一次，缺点是什么？后者将菌种与无菌体积等量混合后保存在多少度冷冻箱中？
（三）课堂总结、点评
课后探究
１、收集生活中与微生物有关的实例，并通过所学知识对其进行
解释
２、我们打针输液时，首先要用酒精擦拭针刺处，为什么？

微生物的营养

一位优秀的教师不打无准备之仗，会提前做好准备，教师在教学前就要准备好教案，做好充分的准备。教案可以让学生更好地进入课堂环境中来，帮助教师更好的完成实现教学目标。怎么才能让教案写的更加全面呢？以下是小编收集整理的“微生物的营养”，仅供参考，大家一起来看看吧。

选修本
第17课时微生物的营养

一、微生物的营养物质分为、、、和五大类。
（1）碳源——无机碳源如：；有机碳源如：。
（2）氮源——无机氮源如：；有机氮源如：。
（3）生长因子——主要包括、、等。
二、培养基的配制原则：1．2．3．
三、培养基的种类
1．根据物理性质：

种类是否含凝固剂用途
固体培养基
半固体培养基
液体培养基

2．根据化学成分：

种类化学成分是否明确用途
合成培养基
天然培养基

编号成分含量
①粉状硫10.00g
②（NH4）2SO40.40g
③K2HPO44.0g
④MgSO49.25g
⑤FeSO40.50g
⑥CaCl20.50g
⑦H2O100ml

3．根据用途

种类制备方法原理用途实例
选择培养基
鉴定培养基

右表是某微牛物培养液成分。请据此回答：
(1)右表培养基可培养的微生物类型是；
(2)若不慎将过量NaCl加入培养基中，如不想浪费此培养基，可再加入，用于培养；
(3)若除去成分②，加入(CH20)，该培养基可用于培养；
(4)表中营养成分共有类；
(5)不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是；(6)右表中各成分重量确定的原则是；
(7)若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是。
答案：⑴自养微生物⑵含碳有机物金黄色葡萄球菌⑶固氮微生物⑷3⑸调整PH值⑹依微生物的生长需要确定⑺琼脂（或凝固剂）

一、选择题
1．下列物质中，能为根瘤提供碳源、氮源的
　Ａ．大豆粉和蛋白　Ｂ．CO2和N2　Ｃ．葡萄糖和N2Ｄ．碳酸盐和NH3
2．下列关于生长因子的叙述不正确的是
　Ａ．生长因子是指微生物生长不可缺少的微量有机物
　Ｂ．一般是酶、核酸的组成部分
　Ｃ．自身不能合成，必须由外界补充
　Ｄ．主要包括维生素、氨基酸和碱基等
3．对下列培养基的叙述正确的是
　Ａ．制作固体培养基必须加入琼脂　Ｂ．加入青霉素可得到放线菌
　Ｃ．培养自生固氮菌不需氮源　Ｄ．发酵工程一般用半固体培养基
4．要从多种细菌中分离某种细菌，培养基要用
　Ａ．固体培养基　Ｂ．液体培养基
　Ｃ．加入青霉素的培养基　Ｄ．加入高浓度食盐的培养基
二、非选择题
5．下表是一种培养基的配方。请回答:

牛肉膏0.5g
蛋白胨1g
NaCl0.5g
琼脂2g
水200mL

（1）此培养基的营养要素有类,其中蛋白胨能提供的是。
（2）各成分重量确定的原则是。
（3）在各种成分溶化后分装前，须进行的是。
（4）该培养基依物理性质划分属于培养基，能培养的细菌代谢类型是。
（5）如要鉴别自来水中的大肠杆菌是否超标，需加入。观察它的。
（6）此培养基能否用于培养产生人的生长激素的工程菌？。原因是。
（7）若有几种杂菌混合在一起，可采用什么方法将它们分离？。若细菌中混杂有酵母菌，要将酵母菌分离出来，可采用。

自我评价答案
1C2C3C4A5（1）五碳源、氮源、生长因子、能源（2）根据所培养微生物的营养需要（3）调节PH值（4）固体异养型（5）伊红——美蓝菌落（6）不能工业生产常使用液体培养基（7）在固体培养基上用划线法或稀释后用点接法在选择培养基中加入青霉素

微生物发酵与食品生产

一名合格的教师要充分考虑学习的趣味性，作为高中教师就要好好准备好一份教案课件。教案可以让学生更容易听懂所讲的内容，让高中教师能够快速的解决各种教学问题。那么，你知道高中教案要怎么写呢？以下是小编为大家收集的“微生物发酵与食品生产”但愿对您的学习工作带来帮助。

辅导教案
1．利用________的方法将特定的基因转移到______中，获得能生产特定产品的__________，再通过工程菌的________技术生产出大量的以前难以得到的各种产品。
2．发酵是指在________利用________________大量生产和积累特定____________的过程。发酵食品是指把____________利用____________生产和加工制作的食品。
3．现代发酵生产的工艺流程包括______、________、____________、______、______、________产物等阶段。
4．发酵过程中，要及时检测培养液中的________、______等，控制发酵进程。还要及时添加必需的______，以满足微生物的营养要求。同时，要严格控制____________、____________、____________等发酵条件。
参考答案
1．基因工程　微生物　基因工程菌　发酵培养
2．一定条件下　微生物的生命活动　代谢产物或菌体　农副产品原料　发酵方法
3．菌种选育　菌种的扩大培养　培养基配制及灭菌
接种　发酵　分离和提纯
4．菌体浓度　产物的含量　营养成分　温度　pH　溶氧量

1．微生物有哪些类群？
答案：

分类形态结构生活方式代表生物
病毒无细胞
结构主要由核酸
和蛋白质衣
壳组成寄生植物病毒、
动物病毒、
噬菌体
原核生
物界单细胞原核细
胞结构寄生、腐
生、自养细菌、蓝藻、
放线菌
真菌界单细胞或
多细胞真核细
胞结构腐生、
寄生酵母菌、
霉菌等
原生生
物界单细胞真核细
胞结构寄生、异
养、自养衣藻、变形
虫、疟原
虫等

2．微生物需要哪些营养？
答案：

营养物质主要种类功能
碳源CO2、NaHCO3、糖类、脂肪酸等提供微生物合成有机物的碳元素
氮源分子态氮、氨、铵盐、硝酸盐、尿素、牛肉膏、蛋白胨为微生物合成含氮物质提供氮素
生长因子维生素、氨基酸、碱基(嘌呤、嘧啶)提供合成核酸、酶的原料
水—溶剂和生化反应的介质
无机盐P、S、Mg、Fe、K、Ca、Mo、Mn、Ni、Cu、I、Br等酶的成分、调节渗透压

3．影响发酵过程的因素有哪些？
答案：(1)温度
温度对微生物的影响是多方面的。首先，温度影响酶的活性。在最适温度范围内，随着温度的升高，菌体生长和代谢加快，发酵反应的速率加快。当超过最适温度范围以后，随着温度的升高，酶很快失活，菌体衰老，发酵周期缩短，产量下降。温度也影响生物合成的途径。
(2)pH
pH能够影响酶的活性，以及细胞膜的带电状况。细胞膜的带电状况如果发生变化，膜的通透性会改变，从而有可能影响微生物对营养物质的吸收及代谢产物的分泌。
(3)溶解氧
氧的供应对需氧发酵来说是一个关键因素。必须向发酵液中连续补充大量的氧，并要不断地进行搅拌，这样可以提高氧在发酵液中的溶解度。
(4)泡沫
在发酵过程中，通气搅拌、微生物的代谢过程及培养基中某些成分的分解等，都有可能产生泡沫。发酵过程中产生一定数量的泡沫是正常现象，但过多的持久性泡沫对发酵是不利的。因为泡沫会占据发酵罐的容积，影响通气和搅拌的正常进行，甚至导致代谢异常，因而必须消除泡沫。
(5)营养物质的浓度
发酵过程中各种营养物质的浓度，特别是碳氮比、无机盐和维生素的浓度，会直接影响菌体的生长和代谢产物的积累。

某人利用乳酸菌制作泡菜，因操作不当泡菜腐烂。下列原因中正确的是()
①罐口密闭缺氧，抑制了乳酸菌的生长繁殖　②罐口封闭不严，氧气抑制了乳酸菌的生长繁殖　③罐口封闭不严，氧气抑制了其他腐生菌的生长繁殖　④罐口封闭不严，促进了需氧腐生菌的生长繁殖
A．①③　B．②④
C．②③D．①④
解析：乳酸菌是厌氧型生物，在缺氧条件下进行发酵产生乳酸，同时产生的乳酸抑制了其他微生物的生长繁殖，制成泡菜。如果罐口密封不严，有氧条件下乳酸菌的发酵作用受到抑制，同时好氧型腐生菌大量繁殖，使泡菜腐烂变质。
答案：B
1．用酵母菌酿酒时，向原料中通入足够的空气，酵母菌的数量与酒精产量的变化分别是()
A．死亡、增多B．增多、不再产生
C．增多、增多D．死亡、不再产生
发酵罐发酵的过程中，使温度升高的热量来源于…()
①冷水供应不足　②微生物代谢旺盛　③搅拌　④培养基不新鲜
A．①②B．②③
C．①④D．②④
解析：解答此题用排除法较易得出答案。第一，题目问的是使温度升高的热量来源，而冷水只能带走热量，不能产生热量。第二，培养基的新鲜程度可影响代谢速度，但与热量无直接关系。第三，微生物发酵过程中要进行呼吸作用，产生大量的化学能，其中大部分转变成了热能而使温度升高。第四，搅拌增加了溶氧，加快反应速度，同时通过摩擦产生了热能，也可使温度升高。
答案：B
2．下列有关谷氨酸发酵的叙述中正确的是()
A．发酵中不断通入空气
B．培养条件不当将不能得到产品
C．搅拌的唯一目的是使空气成为小泡
D．冷却水可使酶活性下降
可作为硝化细菌的碳源、氮源、能量来源的是()
A．含碳有机物、氨、光
B．含碳无机物、氨、氮
C．含碳无机物、氨、化学能
D．含碳有机物、氨、氨
解析：硝化细菌是化能自养型生物，自养型生物的碳源是CO2、碳酸盐等含碳无机化合物。所需氮源是无机氮化物，能作化能自养型微生物能源的物质都是一些还原态无机物质，如氨既是硝化细菌的能源(氨经氧化产生能量——化学能)，又是其氮源。
答案：C
3．关于微生物的营养，说法正确的是()
A．同一种物质不可能既作碳源又作氮源
B．凡是碳源都能提供能量
C．除水以外的无机物仅提供无机盐
D．无机氮源也能提供能量
关于菌种的选育不正确的是()
A．自然选育的菌种不经过人工处理
B．诱变育种原理的基础是基因突变
C．通过有性杂交可形成工程细菌
D．采用基因工程的方法可构建工程菌
解析：自然选育菌种是根据人们的需求用固体培养基进行筛选，要经过人工处理。菌种可以是细菌和真菌，工程菌可经过诱变育种、基因工程、细胞工程、有性杂交等获取。
答案：A
4．基因工程培育的“工程菌”通过发酵工程生产的产品有()ks5u
A．白细胞介素B．乳酸
C．柠檬酸D．抗生素

参考答案
课堂反馈
1．B　解析：酵母菌属兼性厌氧型微生物，在有氧的条件下，将糖类物质分解成二氧化碳和水；在无氧的条件下，产生二氧化碳和酒精。用酵母菌酿酒是利用其无氧呼吸产生酒精的原理。原料中通入足够的空气，酵母菌进行旺盛的有氧呼吸，新陈代谢旺盛，繁殖快，且有氧情况下无氧呼吸受抑制，使酒精产量下降。
2．B　解析：进行谷氨酸发酵的菌种是异养需氧型微生物，所以在培养过程中要不断通入无菌空气，避免杂菌污染。搅拌不但使空气形成小泡以增加培养液中的溶氧量，还能使培养液与菌种充分接触，提高原料的利用率。发酵罐发酵的过程中，微生物代谢、搅拌等使培养液温度升高，冷却水可降低温度，是保证酶正常活性的条件之一，而不是使酶的活性降低。当培养条件不当时不会得到谷氨酸，如pH降低时将得到乙酰谷氨酰胺。
3．D　解析：考查对微生物的营养和能源的理解。含C、H、O、N的化合物既是微生物的碳源，又是微生物的氮源；有机碳源能提供能量，无机碳源不能提供能量；无机物可提供碳源、氮源和能源。如：①CO2是光能自养细菌的碳源，但不能提供能量；②CO2和N2是无机物，也是微生物的碳源和氮源；③硝化细菌所利用的氮源是无机氮，即氨，同时氨也为硝化细菌提供用以进行化能合成作用的能源。
4．A　解析：乳酸、柠檬酸是传统发酵工业产品；抗生素是现代发酵工业产品；白细胞介素是干扰素的一种，是利用基因工程获得基因工程菌，再通过现代发酵技术获得的。

文章来源：http://m.jab88.com/j/19867.html

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