一名优秀的教师在教学方面无论做什么事都有计划和准备，作为教师就要在上课前做好适合自己的教案。教案可以让学生们能够在上课时充分理解所教内容，让教师能够快速的解决各种教学问题。那么如何写好我们的教案呢？以下是小编为大家收集的“选修一生物2.3分解纤维素的微生物的分离学案（人教版）”欢迎大家阅读，希望对大家有所帮助。

课题3　分解纤维素的微生物的分离
问题导学
一、刚果红染色法
活动与探究1
1．刚果红染色法筛选纤维素分解菌的原理是什么？
2．常用的刚果红染色法有哪几种？它们在加入刚果红的时间上有什么不同？
3．讨论在刚果红培养基上出现透明圈，是否说明一定是由纤维素分解菌形成的？
迁移与应用1
在含纤维素的培养基中加入刚果红溶液，菌落周围出现明显透明圈的是（）。
A．分解尿素的细菌
B．硝化细菌
C．分解纤维素的细菌
D．乳酸菌
1．刚果红染色法鉴别纤维素分解菌的原理
菌落周围有透明圈――→说明纤维素被分解――→说明有纤维素酶――→说明有纤维素分解菌
2．两种刚果红染色法的比较
染色法优点缺点
先培养微生物，再加入刚果红颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用操作烦琐，刚果红会使菌落之间发生混杂
倒平板时就加入刚果红操作简便，不存在菌落混杂问题产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈，有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分
二、分离纤维素分解菌的实验设计
活动与探究2
1．用流程图表示本实验的操作流程。
2．本实验与课题2中的实验在实验流程上有哪些异同？
3．将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋进土壤多深？
4．阅读教材第29页旁栏中的纤维素分解菌选择培养基的成分回答下列问题。
（1）旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？
（2）这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果有，是如何进行选择的？
5．阅读教材第30页中的“课题延伸”部分，回答以下2个问题。
（1）分离纯化纤维素分解菌后，如何通过实验对其进一步确定？
（2）如何测定样品中有无纤维素酶？
迁移与应用2
分解纤维素的微生物的分离实验过程中操作有误的是（）。
A．经选择培养后直接将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上
B．选择培养这一步可省略，但纤维素分解菌的浓度会减少
C．经稀释培养后，用刚果红染色法来鉴定能产生纤维素酶的菌落
D．对照组可用等量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上
1．选择培养
（1）具体操作
称取土样20g加入装有30mL选择培养基的锥形瓶―→锥形瓶固定在摇床上――→30℃振荡培养1～2d培养液变混浊―→
（2）设置对照
将（1）过程中的选择培养基改为不含纤维素的培养基，如牛肉膏蛋白胨基础培养基，其余过程均与（1）过程相同。
2．筛选过程中用到的两种培养基
（1）名称：①纤维素分解菌的选择培养基；②纤维素分解菌的鉴别培养基。
（2）区别
①纤维素分解菌的选择培养基为液体培养基，利用液体培养基能使营养成分充分消耗，以增加纤维素分解菌的浓度。
②纤维素分解菌的鉴别培养基为固体培养基，因为要在培养基上形成我们肉眼可见的菌落。
③在上述选择培养基中能以纤维素作为碳源和能源的微生物可以正常生长，而其他绝大多数微生物不能正常生长；而在上述鉴别培养基中，绝大多数微生物都可以正常生长。
答案：
课前预习导学

一、1．（1）葡萄糖　多糖　纤维素酶　（2）纤维素含量　木材　作物秸秆
2．纤维素酶　复合酶　C1酶　CX酶　葡萄糖苷酶
3．（1）刚果红染色法　颜色反应　（2）红色复合物　纤维素酶　透明圈　产生透明圈
预习交流1：（1）提示：纤维素主要存在于植物细胞的细胞壁中，是植物细胞壁的主要组成成分，细胞壁越发达，纤维素的含量越多。纤维素的性质比较稳定，由纤维素构成的细胞壁具有支持和保护作用。
（2）提示：自然界中的纤维素主要被土壤中的微生物分解利用。其余的一部分被草食动物取食利用（实质上也离不开微生物的分解作用），一部分作为能源被人类燃烧利用。
二、1．选择培养　分解菌　透明圈
3．（2）选择培养基　1～2　混浊
4．刚果红
预习交流2：（1）提示：对需选择的微生物有利并起“浓缩”作用。
（2）提示：属于选择培养基。
（3）提示：在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用。
三、1．发酵产纤维素酶　液体　固体
2．葡萄糖
课堂合作探究

活动与探究1：
1．提示：（1）刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但不与水解后的纤维二糖及葡萄糖发生这种反应。（2）纤维素分解菌能产生纤维素酶分解纤维素，从而使菌落周围形成透明圈。
2．提示：一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红。
3．提示：不一定。产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈。
迁移与应用1：C　解析：分解纤维素的细菌能将纤维素分解，刚果红—纤维素复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。
活动与探究2：
1．提示：土壤取样→选择培养→梯度稀释→avs4al（将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上）→挑选产生透明圈的菌落。
2．提示：课题2是将土壤样品制成的菌悬液直接涂布在以尿素为唯一氮源的选择培养基上，直接分离得到菌落。本课题通过选择培养，使纤维素分解菌得到增殖后，再将菌液涂布在鉴别培养基上。其他步骤基本相同。
3．提示：将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对聚集，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将纸埋于深约10cm的腐殖土壤中。
4．（1）提示：是液体培养基，因为配方中无凝固剂。
（2）提示：有选择作用，本配方中的唯一碳源是纤维素粉，所以只有能分解纤维素的微生物才可以大量繁殖。
5．（1）提示：进行发酵产生纤维素酶的实验。
（2）提示：对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定，注意设置对照实验。
迁移与应用2：A
当堂检测
1．下列关于纤维素酶的说法，错误的是（）。
A．纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种组分
B．纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖
C．纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁
D．葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖
答案：D　解析：纤维素酶是一种复合酶，包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，C1酶和Cx酶能把纤维素分解为纤维二糖，而葡萄糖苷酶能把纤维二糖进一步分解为葡萄糖。
2．在加入刚果红的纤维素分解菌培养基中会出现透明圈，产生的透明圈是（）。
A．刚果红与纤维素形成的复合物
B．刚果红与纤维二糖形成的复合物
C．纤维素分解后形成的葡萄糖导致的
D．以纤维素分解菌为中心形成的
答案：D　解析：当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红—纤维素复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。
3．鉴定纤维素分解菌时，可以使用刚果红对其染色，常用的刚果红染色法有两种，一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红。两种染色法的结果是（）。
A．均会出现透明圈
B．均不会出现透明圈
C．方法一出现透明圈，方法二不出现透明圈
D．方法一不出现透明圈，方法二出现透明圈
答案：A　解析：两种刚果红染色法虽然程序不同，但最终都会使培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。
4．在将样品稀释涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上之前一般先进行选择培养，其主要目的是（）。
A．完全除去其他微生物
B．没有意义，去掉这一步更好
C．增加纤维素分解菌的浓度
D．使纤维素分解菌充分长大
答案：C　解析：选择培养在选择培养基中进行，能使纤维素分解菌快速增殖从而增加其浓度，而其他不能分解纤维素的微生物的增殖却受到抑制。
5．通过分离分解纤维素的微生物实验，对分解纤维素的微生物进行了初步的筛选，这只是分离提纯的第一步。对分离的菌种作进一步鉴定，还需要进行（）。
A．发酵产纤维素酶的实验
B．提取纤维二糖的实验
C．浓缩纤维素分解菌的实验
D．提取葡萄糖的实验
答案：A　解析：对纤维素分解菌的鉴定，常用的方法是对分离的菌种进行发酵产纤维素酶的实验。
绘制分离分解纤维素的微生物的实验流程图。

延伸阅读

高二生物《分解纤维素的微生物的分离》典型教案分析

一名优秀的教师在教学时都会提前最好准备，高中教师要准备好教案，这是每个高中教师都不可缺少的。教案可以让讲的知识能够轻松被学生吸收，帮助高中教师在教学期间更好的掌握节奏。那么怎么才能写出优秀的高中教案呢？下面是小编精心为您整理的“高二生物《分解纤维素的微生物的分离》典型教案分析”，但愿对您的学习工作带来帮助。

高二生物《分解纤维素的微生物的分离》典型教案分析

纤维素，一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是地球上含量最丰富的多糖类物质。

纤维素与纤维素酶

（1）棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物，木材、作物秸秆等也富含纤维素。

（2）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维素最终被水解成葡萄糖，为微生物的生长提供营养。

纤维素分解菌的筛选

（1）筛选方法：刚果红染色法。能够通过颜色反应直接对微生物进行筛选。

（2）刚果红染色法筛选纤维素分解菌的原理

刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红－纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。这样，我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。

分离分解纤维素的微生物的实验流程

土壤取样→选择培养（此步是否需要，应根据样品中目的菌株数量的多少来确定）→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落

（1）土壤采集选择富含纤维素的环境。

（2）刚果红染色法分离纤维素分解菌的步骤倒平板操作、制备菌悬液、涂布平板

（3）刚果红染色法种类

一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红。

课题延伸

对分解纤维素的微生物进行了初步的筛选后，只是分离纯化的第一步，为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验，纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵两种。纤维素酶的测定方法，一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定。

疑难解答

（1）为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌？

由于生物与环境的相互依存关系，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境。

（2）将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋进土壤多深？

将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对聚集，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将纸埋于深约10cm左右腐殖土壤中。

（3）两种刚果红染色法的比较

方法一是传统的方法，缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。方法二的优点是操作简便，不存在菌落混杂问题，缺点是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质，可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应。但这种只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊，因为培养基中纤维素占主要地位，因此可以与纤维素酶产生的透明圈相区分。方法二的另一缺点是：有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分。

（4）为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？

在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用。

观察土壤中能水解纤维素的微生物

辅导教案
导学诱思DAOXUEYOUSI

一、纤维素
1．化学组成：由________三种元素组成，属于________类中的________。ks5u
2．植物的细胞壁主要由________、________和________组成。ks5u
答案：1.C、H、O　糖　多糖
2．纤维素　木质素　半纤维素
ks5u
二、水解纤维素的微生物
1．现已发现的能水解纤维素的微生物：
________、________、________、________等。
2．这些微生物能水解纤维素的原因：
它们能分泌________，________分解纤维素。
答案：1.绿色木霉　变异青霉　黑曲霉　根霉
2．纤维素酶　酶促

三、纤维素酶
1．纤维素酶：不是单一的一种酶，而是________，它包括________酶、________酶和________酶，不同酶________不同。
2．纤维素酶的作用：纤维素酶能催化水解纤维素(具体作用如下)

答案：1.一类酶的总称　C1　CX　β葡萄糖苷　水解的作用

四、观察土壤中能水解纤维素的微生物实验
1．实验材料：
(1)80g______土或______的土：可以从其中获得________。
(2)________纸(90cm2)2张
(3)自来水
(4)________的纸6张：从其中获得________
2．实验步骤：
(1)灭菌：将培养皿、三角瓶、自来水以及________土壤用灭菌锅在1kg压力下灭菌30min。
(2)设置对照实验：
将________和________等量土壤分别放在2个经灭菌处理的培养皿中，互相形成对照。
(3)培养
将________等分成2份，分别放在上述2个有土样的培养皿的________，培养皿不加盖，可用牛皮纸遮盖保湿。然后置于________的培养室中。________周后观察卷烟纸的变化(是否消失)。
答案：1.(1)草炭　枯树周边　能水解纤维素的微生物　(2)牛皮　(4)卷烟　纤维素
2．(1)一半　(2)已灭菌　未灭菌的　(3)6张卷烟纸　土壤表面　较高湿度　4～6

核心解读HEXINJIEDU
1．纤维素在元素化合物分类上的地位是怎样的？纤维素与纤维素酶一样吗？
组成生物各种化学元素一般都以化合物形式存在。其中纤维素是糖类中多糖的一种，而纤维素酶的化学本质是蛋白质，它能催化水解纤维素。它们在化合物的分类系统中所处的位置见下表。
2．为什么从卷烟纸中去获取纤维素呢？为什么纤维素不直接从植物枝条上获取呢？
植物的细胞壁主要由纤维素、木质素和半纤维素组成。因此纤维素主要来自植物，如木材、芦苇和甘蔗，主要用于造纸。造纸时取树皮再用NaOH处理以去除木质素和半纤维素，但保留纤维素。木质素可抑制纤维素酶的活力。
卷烟纸一般不含木质素，因为木质素所含有的苯酚对人体有害。因此从卷烟纸中既能获得纤维素，又不会有木质素和半纤维素的干扰，实验效果好。
3．能分解纤维素的微生物属于什么菌？为什么？
现已发现的能水解纤维素的微生物有绿色木霉、变异青霉、黑曲霉、根霉等。它们都属于霉菌。而不是细菌和酵母。这是因为“细菌吃荤，霉菌吃素”，也就是说，细菌多以蛋白质水解物为它的能源，而霉菌多以糖或多糖水解产物为能源。而纤维素属于多糖，因此，水解纤维素的多为霉菌。酵母由于一般不含纤维素酶、淀粉酶等，所以它只能利用单糖或二糖等作为碳源和能源。

题例领悟TILILINGWU

本实验中选用卷烟纸为实验材料，主要是为了获得()
A．纤维素酶
B．纤维素
C．木质素和半纤维素
D．能水解纤维素的微生物
解析：本题考查实验材料的选择原因。纤维素主要存在于木材、芦苇、甘蔗等，主要用于造纸。卷烟纸中一般不含木质素，但含纤维素。当木质素存在时会对纤维素酶产生干扰。因此，用卷烟纸可获得纤维素，且无木质素的干扰。
答案：B

酶发生作用是需要一定的条件的。不仅仅是温度、pH等，其他物质的存在也会降低酶的活力。如：木质素就会降低纤维素酶的活动。
能水解纤维素的微生物是下列哪一组()
A．酵母菌、大肠杆菌
B．细菌、酵母菌
C．硝化细菌、病毒
D．霉菌
解析：酵母菌通常不含纤维素酶，只能利用单糖、双糖等作物为碳源、能源。细菌多以蛋白质水解物为它的能源，只有霉菌多以糖或多糖的水解产物为能源。所以它们能利用多糖，能水解纤维素。
答案：D

不同的微生物都需要碳源、能源。但由于遗传差异，它们的碳源、能源各不相同。

随堂训练SUITANGXUNLIAN

1细胞壁的主要成分是哪3种()
A．纤维素、半纤维素、木质素
B．纤维素、淀粉、果胶
C．纤维素、木质素、果胶
D．纤维素、半纤维素、淀粉
答案：A　解析：细胞壁的主要成分有3种，分别是纤维素、半纤维素、木质素。
2目前已知的能水解纤维素的微生物是()
①细菌　②病毒　③酵母菌　④霉菌　⑤木霉　⑥根霉　⑦噬菌体　⑧黑曲霉
A．①④　B．②③⑦
C．④⑤⑥⑧D．③④
答案：C　解析：能水解纤维素的微生物一般都含纤维素酶。这些微生物一般都是霉菌，即④⑤⑥⑧，而病毒及其他微生物则不能。

选修一生物2.1微生物的实验室培养学案（人教版）

俗话说，居安思危，思则有备，有备无患。教师在教学前就要准备好教案，做好充分的准备。教案可以让学生们能够更好的找到学习的乐趣，减轻教师们在教学时的教学压力。教案的内容具体要怎样写呢？为此，小编从网络上为大家精心整理了《选修一生物2.1微生物的实验室培养学案（人教版）》，仅供您在工作和学习中参考。

课题1　微生物的实验室培养
问题导学
一、培养基和无菌技术
活动与探究1
1．配制培养基所用的琼脂的成分和作用是什么？
2．为什么有的微生物培养基中需加入特殊营养物质？
3．培养基是如何分类的？
4．消毒和灭菌的原理、实质相同吗？
5．请判断以下材料或用具是需要消毒还是灭菌。
（1）培养细菌用的培养基与培养皿。
（2）玻璃棒、试管、烧瓶和吸管。
（3）实验操作者的双手。
迁移与应用1
灭菌的标准是（）。
A．杀死所有的病原微生物
B．杀死物体表面所有的微生物
C．杀死所有的微生物，包括芽孢和孢子
D．使病原菌不生长
1．培养基的类型及应用
标准培养基类型配制特点主要应用
物
理
性
质固体培养基加入琼脂较多菌种分离，
鉴定，计数
半固体培养基加入琼脂较少菌种保藏
液体培养基不加入琼脂工业生产，
连续培养
化
学
成
分天然培养基含化学成分不明
确的天然物质工业生产
合成培养基培养基成分明确分类鉴定
目
的
用
途鉴别培养基添加某种指示剂
或化学药剂菌种的鉴别
选择培养基添加（或缺少）
某种化学成分菌种的分离
注：培养基中的营养物质是维持机体生命活动，保证生殖、发育所需的外源物质。在人和动物中，营养物质包括水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类；在植物中，营养物质包括矿质元素、水、二氧化碳三类；微生物共有的营养成分有水、无机盐、碳源、氮源，有些微生物还需要特殊营养物质。
2．实验室常用的消毒或灭菌方法
灭菌或消毒种类主要方法应用范围
灼烧灭菌酒精灯火焰灼烧接种环、接种针及试管口等
干热灭菌干热灭菌箱内，在160～170℃下加热1～2h玻璃器皿、金属用具等
巴氏消毒70～75℃下煮30min牛奶、啤酒等一些不耐高温的液体
高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌锅内，100kPa，121℃下持续加热15～30min培养基等
紫外线消毒30W紫外线灯照射30min接种室空气等
化学药物消毒用体积分数为70%～75%的乙醇、碘酒涂抹等用于皮肤、伤口、动植物组织表面消毒，手术器械、玻璃器皿等消毒
二、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
活动与探究2
1．用流程图表示该培养基的制备过程。
2．如果倒平板过程中，皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？
3．培养基灭菌后，需要冷却至50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？
4．平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
迁移与应用2
关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，下列叙述错误的是（）。
A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯
C．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板
D．待平板冷却凝固约5～10分钟后将平板倒过来放置
1．由于不同的微生物生长对pH的需求不同，如培养霉菌时需将培养基调至酸性，培养细菌时需将培养基调至中性或微碱性，所以在培养基各组分溶化后需要先用酸或碱将pH调至微生物生长的最适宜条件，再进行灭菌处理。
2．培养基需要冷却至50℃时才能开始倒平板的原因：琼脂是一种多糖，在98℃以上熔化，在44℃以下凝固，倒平板时高于50℃则会烫手，低于50℃时若不能及时操作，琼脂会凝固。
三、纯化大肠杆菌
活动与探究3
1．纯化大肠杆菌时需要接种，请列举接种的技术并说出它们共同的核心操作。
2．什么叫菌落？如何从“菌落”角度评价平板划线法或稀释涂布平板法的成功性？
3．学习教材第18页平板划线操作，思考下列问题。
（1）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？
（2）在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
（3）平板划线时不能划破培养基的原因是什么？
4．学习教材第19页稀释涂布平板操作，思考下列问题。
（1）稀释涂布平板法的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线法与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第二步应如何进行无菌操作？
（2）操作结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个接种的培养基放在一起培养？
迁移与应用3
下图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为1→2→3→4→5。下列操作方法正确的是（）。
A．只在操作前将接种环放在火焰边灼烧灭菌
B．划线操作须在火焰上进行
C．在5区域中才可以得到所需菌落
D．在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌
1．接种方法的比较及分析
（1）平板划线法：操作简单，但是单菌落不易分离。
（2）稀释涂布平板法：操作复杂，但是单菌落易分离。
（3）稀释涂布平板法统计样品中菌落的数目往往比实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
2．结果评价
如果培养基上生长的菌落在颜色、形状、大小上基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，重新操作。
答案：
课前预习导学

一、1．生长繁殖
2．（1）液体　（2）液体　琼脂　琼脂固体　固体　菌落
3．（1）水　碳源　氮　（2）pH　氧气　维生素　酸性　中性　微碱　无氧
预习交流1：（1）提示：构成细胞的基本元素有C、H、O、N4种，由此推测培养基应含有提供C的物质（碳源）、提供N的物质（氮源）、提供H和O的物质（H2O）。
（2）提示：还有P、S、K、Ca、Mg等，据此推测培养基中应含有提供P、S、K、Ca、Mg等元素的物质（无机盐）。
（3）提示：自养微生物的碳源是含碳的无机物，主要是CO2、NaHCO3等，而异养微生物的碳源则是含碳的有机物，如糖类、脂肪酸等。
二、1．外来杂菌
2．物理　化学　一部分　芽孢　孢子
3．理化因素　内外　芽孢　孢子
4．（1）空间　衣着　手　（2）器皿　接种用具　培养基　（3）酒精灯火焰　（4）灭菌　周围的物品
5．（1）巴氏消毒　（2）灼烧　（3）干热　（4）100　121　15～30　（5）紫外线　化学药物
预习交流2：（1）提示：被褥、鞋袜要常晒；肉制品储存时用盐腌等。
（2）提示：家畜阉割后，要在其伤口涂抹一些酒精或白酒；初冬杨树树干涂刷生石灰水等。
（3）提示：打针时，注射部位要用酒精棉球擦洗；家畜阉割后，要在其伤口处涂抹一些酒精。
三、2．容易吸潮
3．琼脂糊底
4．高压蒸汽　干热
5．50　酒精灯火焰
四、1．平板划线法　稀释涂布平板法
2．一个　子细胞群体
五、临时保藏　甘油管藏
课堂合作探究

活动与探究1：
1．提示：琼脂是从红藻中提取的多糖，在配制培养基时作为凝固剂。
2．提示：因为有的微生物缺乏合成这些物质所需的酶或合成能力有限。
3．提示：按物理性质分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基；按化学成分分为天然培养基和合成培养基；按用途分为选择培养基和鉴别培养基。
4．提示：原理相同，都是使微生物的蛋白质变性，借此杀死微生物；实质不同，灭菌可杀死物体内外的全部微生物（包括芽孢和孢子），而消毒仅杀死部分微生物。
5．提示：（1）（2）需要灭菌，（3）需要消毒。
迁移与应用1：C　解析：灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
活动与探究2：
1．提示：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板
2．提示：不能。空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基，因此，最好不要用这种平板培养微生物。
3．提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
4．提示：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。
迁移与应用2：A　解析：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，不能颠倒。牛肉膏容易吸潮，所以当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸。待培养基冷却至50℃左右，用手触摸锥形瓶刚刚不烫手，并且培养基处于溶化状态时进行倒平板。平板冷却几分钟后还需倒置。
活动与探究3：
1．提示：菌种的接种技术包括平板划线操作、稀释涂布平板操作、斜面接种、穿刺接种等，它们共同的核心操作是防止杂菌污染，保证培养物的纯度。
2．提示：在培养基上由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体叫菌落。平板划线法或稀释涂布平板法如能在培养基上得到单个的菌落就是成功的。
3．（1）提示：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单菌落。划线结束后需要灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者。
（2）提示：以免接种环温度太高杀死菌种。
（3）提示：一是划破培养基会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是即使在划破处有单个细胞，也无法形成规则的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。
4．（1）提示：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适，吸管头不要接触任何其他物体，吸管要在酒精灯火焰周围等。
（2）提示：培养未接种培养基的作用是对照，未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的。若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底，或培养基被污染了，需要重新制备。
迁移与应用3：D　解析：操作前后都要对接种环进行灭菌；划线操作须在火焰旁进行，而不是火焰上；所有的划线区都有可能得到所需菌落。
当堂检测
1．某培养基的配方表如下，下列叙述正确的是（）。
成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4伊红美蓝蒸馏水
含量10g10g2g0.4g0.065g定容至1000mL
A．从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于选择培养基
B．培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨
C．该培养基缺少提供生长因子的物质
D．培养基调节好pH后就可以接种菌种
答案：B　解析：此配方中，葡萄糖主要作碳源，蛋白胨作氮源，同时还可提供生长因子。从用途看该培养基为鉴别培养基。在调节好pH后还需灭菌，然后才可用于菌种的培养。
2．不同的微生物对营养物质的需要各不相同。但一般都需要水、碳源、氮源和无机盐。下列有关微生物所需营养物质的描述中，正确的是（）。
A．氮源物质只能为该微生物提供必要的氮元素
B．有些碳源也可以给微生物的生长提供能源
C．无机盐是该微生物不可缺少的营养物质，所以无机盐越多越好
D．固体培养基中不含水分
答案：B　解析：含氮的有机物既可给微生物提供氮元素，也可给微生物提供能源；含碳的有机物既可给微生物提供碳元素，也可给微生物提供能源。微生物生长需要无机盐，但不是越多越好，过多会导致培养基渗透压过高，使微生物因失水过多而不能生存。固体培养基中也含有水分，因为含有凝固剂琼脂，所以呈固态。
3．关于灭菌和消毒的理解不正确的是（）。
A．灭菌是指杀灭环境中的一切微生物，包括芽孢和孢子
B．消毒和灭菌实质上是完全相同的
C．接种环用灼烧法灭菌
D．常用灭菌方法有灼烧法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法
答案：B　解析：消毒是使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子），灭菌则是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
4．下列有关平板划线操作的说法正确的是（）。
A．使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌
B．打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞
C．将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可
D．最后将平板倒置，放入培养箱中培养
答案：D　解析：使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中对接种环也要灭菌；含菌种的试管在打开后和塞棉塞前都要通过酒精灯火焰灭菌；要分区域多次划线，第二次划线要从第一次划线的末端开始。
5．产生标准菌落的细菌的最初数目和培养基分别是（）。
A．一个细菌，液体培养基
B．许多细菌，液体培养基
C．一个细菌，固体培养基
D．许多细菌，固体培养基
答案：C　解析：菌落是由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，因此标准菌落应来源于最初的一个细菌。产生菌落的培养基不可能是液体培养基。
绘制牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备及大肠杆菌纯化的流程图。

选修一生物2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学案（人教版）

俗话说，磨刀不误砍柴工。教师要准备好教案，这是教师需要精心准备的。教案可以让学生们能够在上课时充分理解所教内容，帮助教师能够井然有序的进行教学。关于好的教案要怎么样去写呢？下面的内容是小编为大家整理的选修一生物2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学案（人教版），欢迎大家阅读，希望对大家有所帮助。

课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

1．研究培养基对微生物的选择作用。
2．进行微生物数量的测定。
一、研究思路
1．筛选菌株
尿素是一种重要的农业____肥，但不能直接被农作物吸收利用，只有当土壤中的细菌将尿素分解成____之后，才能被植物利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成______。
（1）实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的______生长的条件（包括营养、______、pH等），同时______或______其他微生物生长。
（2）选择培养基：在微生物学中，将允许________的微生物生长，同时______或______其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
2．统计菌落数目
（1）常用来统计样品中______数目的方法是________。即当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的________。通过统计平板上的________，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在________的平板进行计数。
统计的菌落数往往比活菌的实际数目____。这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用________来表示。
（2）____________也是测定微生物数量的常用方法。
（3）细菌的数目还可以通过______法来测定。例如，测定饮用水中大肠杆菌的数目，可将________的水过滤后，将滤膜放到________培养基上培养，大肠杆菌的菌落呈现____色，可以根据培养基上________的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。
3．设置对照
（1）设置对照的主要目的是排除实验组中__________对实验结果的影响，提高实验结果的________。
（2）对照实验是指除了________的条件以外，其他条件都______的实验，其作用是比照实验组，排除任何其他可能原因的干扰，证明确实是所测试的条件引起相应的结果。
二、实验设计
实验设计包括对实验方案，所需仪器、材料，用具和药品，具体的________以及时间安排等的综合考虑和安排。关于土壤中某样品细菌的分离与计数的实验操作步骤如下：
1．土壤取样
土壤中的微生物70%～90%是_____，绝大多数分布在距地表______的近____性土壤中。
2．样品的稀释
样品的________将直接影响平板上生长的菌落数目。通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在________之间、适于计数的平板。测定土壤中细菌的数量，一般选用____________倍的稀释液进行平板培养。第一次实验时，可将稀释范围放宽一点，以保证能从中选择出适于计数的平板。
3．微生物的培养与观察
不同种类的微生物，往往需要不同的培养______和培养______。细菌一般在30～37℃的温度下培养1～2d，放线菌一般在25～28℃的温度下培养5～7d，而霉菌一般在25～28℃的温度下培养3～4d。
在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取____________时的记录作为结果，以防止因____________而导致遗漏菌落的数目。
一般来说，在一定的培养条件下（相同的培养基、温度及培养时间），同种微生物表现出稳定的菌落特征。菌落的特征包括______________和______等方面。
思考：土壤有“微生物的天然培养基”之称，为什么？
三、操作提示
1．无菌操作
2．做好标记
3．制定计划
四、对分离得到的分解尿素的细菌的鉴定
1．在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的______将尿素分解成了____。氨会使培养基的碱性______，pH______。因此，可以通过检测培养基____的变化来判断该化学反应是否发生。
2．在以______为唯一氮源的培养基中加入______指示剂。培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变____，说明该种细菌能够________。

答案：一、1.氮　氨　脲酶　（1）菌株　温度　抑制　阻止　（2）特定种类　抑制　阻止
2．（1）活菌　稀释涂布平板法　一个活菌　菌落数　30～300　低　菌落数　（2）显微镜直接计数　（3）滤膜　已知体积　伊红美蓝　黑　黑色菌落
3．（1）非测试因素　可信度　（2）被测试　相同
二、实施步骤
1．细菌　3～8cm　中
2．稀释程度　30～300　104、105、106
3．温度　时间　菌落数目稳定　培养时间不足　形状、大小、隆起程度　颜色
思考：由于土壤具备了各种微生物生长所需的营养、水分、空气、酸碱度、渗透压和温度等条件，是微生物生活的良好环境。
四、1.脲酶　氨　增强　升高　pH
2．尿素　酚红　红　分解尿素
1．培养基的类型及其应用
标准培养基类型配制特点主要应用
物理
性质固体培养基加入琼脂较多菌种分离，计数
半固体培养基加入琼脂较少观察微生物的运动、鉴定菌种
液体培养基不加入琼脂工业生产，连续培养
化学
组成合成培养基由已知成分配制而成，培养基成分明确菌种分类、鉴定
天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确工业生产
目的
用途鉴别培养基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别
选择培养基添加（或缺少）某种化学成分菌种的分离
选择培养基配制时可添加某种化学成分，这里的“添加”是在基本培养基的培养成分的基础上加入的。配制固体培养基和半固体培养基时加入的琼脂是从红藻中提取的，其主要成分是水溶性多糖，在配制培养基中作为凝固剂。
2．选择培养基
一般来说，选择培养基是在培养基中加入某种化学成分，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长。如，加入青霉素可以抑制细菌、放线菌的生长，分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而分离得到该菌。
培养基中的营养成分的缺少也可达到分离微生物的目的。如培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。
当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。如石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的。
生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用。所以通过配制选择培养基、控制培养条件等均可以选择出目的微生物，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。
原则上只有目的微生物才能在选择培养基上生长。但实际上，微生物培养是一个非常复杂的问题，有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖，因此能够在选择培养基上生长的微生物是不是所需要的微生物，还需要进一步的验证。
3．显微镜直接计数法与稀释涂布平板法的比较
显微镜直接计数法是利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法是将经过适当稀释的菌悬液放在血球计数板的载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的，所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌和死菌的总和，故又称为总菌计数法。此法的优点是直观、快速，但需要与血球计数板配套使用，且计数随机性大，所以对菌体数量不能做出较为宏观、全面的反映。
平板菌落计数法通常做梯度稀释，所以计数的线性范围大。由于是菌悬液涂布，所以比较均匀，能较好地反映菌落的疏密程度，重复性、平行性好，是经典的计数方法。但需要平板上长出菌落一段时间后才能计数，因此速度慢是最大的缺点。
4．在土壤中采集菌样的方法与要点
由于在土壤中几乎可找到任何微生物，所以土壤往往是首选的采集目标。土壤采样必须考虑以下几个问题：
（1）土壤中有机物的含量：有机物含量高，土质较肥，一般在其中的微生物数量较多，反之微生物数量较少。
（2）采土的深度：土壤的深度不同，其通气、养分和水分的分布情况也不同。表层的土壤直接受日光曝晒，故较干燥，微生物也不易大量繁殖。在离地面5～20cm处的土壤中，微生物含量最高。
（3）植被情况：植被的种类与微生物的分布有着密切的关系。例如，在冬天灌水的水稻田土壤中，真菌分布得较多。
（4）采土的季节：以春秋两季为宜。这时土壤中的养分、水分和温度都较适宜，微生物的数量也最多。采土时尤其应注意土壤的含水量，水分过多会造成厌氧环境，不利于放线菌的生长繁殖。真菌虽需要较高的相对湿度，但基质中的水分却不宜过多。因此要避免在雨季采集土样。此外，土壤的pH也应适当注意，细菌和放线菌在中性或微碱性土壤中居多，而真菌则在偏酸性的土壤中较丰富。
（5）采土方法：选择好适当地点后，用小铲子除去表土，取5～20cm处的土样几十克，盛入事先灭过菌的防水纸袋内，并在上面记录采土时间、地点和植被等情况。
5．实验设计注意事项
（1）设置重复组。实验要有足够的次数，才能避免结果的偶然性，使结论更有说服力与准确性。如该实验中，可在每个稀释度下设置3个选择培养基平板；计数时在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，求平均值。这样也可以为实验是否成功提供参考，如重复组结果不一致，则意味着操作有误，需要重新实验。
（2）设置对照。对照的设置也会增加实验结果的可信度和说服力。如在该实验中，可在配制培养基时，准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基两种，牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用，在相同的稀释度下，牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数应明显多于选择培养基的。另外，要设置空白对照，即在培养基中不加土样，如果空白对照的培养基上没有菌落生长，则说明培养基没有被杂菌污染。
题型一选择培养基的特点与应用
（2009上海高考）氯苯化合物是重要的有机化工原料，因其不易降解，会污染环境。某研究小组依照下列实验方案（图1）筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌。培养基配方如下表。
图1
培养基的组成
液体培养基蛋白胨牛肉膏氯苯氯化钠硝酸铵无机盐（无碳）蒸馏水
Ⅰ号10g5g5mg5g——1L
Ⅱ号——50mg5g3g适量1L
Ⅲ号——20～80mg5g3g适量1L
（1）配制Ⅱ号固体培养基时，除添加Ⅱ号培养基成分外，还应添加1%的________。
（2）培养基配制时，灭菌与调pH的先后顺序是________________________________
________________________________________________。
（3）从用途上来说，Ⅰ号培养基和Ⅱ号培养基分别属于________培养基和________培养基。在Ⅱ号培养基中，为SP1菌提供氮源的成分是________。
（4）在营养缺乏或环境恶劣时，SP1的菌体会变成一个圆形的休眠体，这种休眠体被称为________。
（5）将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的Ⅲ号培养液中培养，得到生长曲线（如图2）。从图2可知，SP1菌在________培养条件下最早停止生长，其原因是____________________
_____________________________________________________________________________。
图2
解析：（1）固体培养基必须含有适量的琼脂。（2）配制培养基时应先调pH后灭菌。（3）Ⅰ号培养基是为了获得更多的菌株，属于通用培养基，Ⅱ号培养基是为了选择出SP1菌株，属于选择培养基，Ⅱ号培养基成分中含N物质为硝酸铵，则应由它为SP1菌株提供氮源。（4）在恶劣环境下一些菌体会形成芽孢休眠体，来度过不良环境。（5）SP1菌株是以氯苯为碳源，当氯苯消耗尽菌株因缺少碳源而不能继续生存，故氯苯含量越少，SP1菌株越早停止生长。
答案：（1）琼脂　（2）先调pH，后灭菌　（3）通用　选择　硝酸铵　（4）芽孢　（5）20mgL－1氯苯　碳源最早耗尽
题型二测定细菌数量的原理与方法
用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是（）。
A．涂布了1个平板，统计的菌落数是230
B．涂布了2个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238
C．涂布了3个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163
D．涂布了3个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233
解析：在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性，所以A、B两项不正确。C项虽涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地用3个平板的计数值求平均值。
答案：D
反思领悟：在设计实验时，一定要涂布至少3个平板作为重复组；在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，如果结果差别过大，则意味着操作有误，需重新实验。
题型三设计微生物的选择方案
用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是（）。
A．未接种的选择培养基B．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基
C．接种了的牛肉膏蛋白胨培养基D．接种了的选择培养基
解析：将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，以牛肉膏蛋白胨培养基作为对照。对照遵循的是单一变量原则，所以与选择培养基一样接种、培养。
答案：C
反思领悟：对照实验是指除了被测试的条件以外，其他条件都相同的实验，其作用是比照实验组，排除任何其他可能原因的干扰，证明确实是所测试的条件引起相应的结果。
1．下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是（）。
A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板
B．取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上
C．将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48h
D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数
2．若大肠杆菌和圆褐固氮菌混合在一起，采用下列哪组培养基可将它们分离？（）
A．加食盐的培养基和牛肉膏蛋白胨培养基B．伊红美蓝培养基和无氮培养基
C．斜面培养基和液体培养基D．加青霉素的培养基和液体培养基
3．分析下面培养基的配方，回答下面的问题。
KH2PO41.4g
Na2HPO42.1g
MgSO47H2O0.2g
葡萄糖10.0g
尿素1.0g
琼脂15.0g
用蒸馏水定容到1000mL
（1）在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是________和________。
（2）按物理性质划分该培养基属于________培养基，理由是培养基中含有________；该类培养基常用于微生物的纯化、________和________。
（3）由于培养基中只有尿素一种______源，所以该培养基只能用于能够合成________的微生物的培养。用此培养基培养土壤浸出液能够从土壤中筛选出________细菌。
（4）在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，并能抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作________培养基。
4．（2011课标全国理综）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答下列问题。
（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以________为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于________培养基。
（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即________和________。
（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力________________________________________________________________________。
（4）通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、________和________。无菌技术要求实验操作应在酒精灯________附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。

答案：1．D　检测土壤中细菌总数，用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上，将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48h，在确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的一组平板为代表进行计数。
2．B　大肠杆菌的代谢产物可与伊红美蓝结合，使菌落呈黑色，圆褐固氮菌能自行固氮，可用无氮培养基选择。
3．解析：（1）碳源是提供碳元素的物质，氮源是提供氮元素的物质。所以碳源是葡萄糖，氮源是尿素。（2）根据物理性质可以将培养基分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基，固体培养基中添加了琼脂作凝固剂，常用于微生物的纯化、分离和计数。（3）绝大多数生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以此培养基对微生物有选择作用，选择对象是能够利用尿素的微生物。
答案：（1）葡萄糖　尿素　（2）固体　凝固剂琼脂　分离　计数　（3）氮　脲酶　分解尿素的　（4）选择
4．解析：（1）要获得分解原油的细菌，应选择以原油为唯一碳源的培养基，以保证这种细菌可以大量繁殖，而其他细菌不能生存。此种培养基属于选择培养基。
（2）纯化菌种常用平板划线法和稀释涂布平板法。
（3）在以原油为唯一碳源的培养基上，在菌落周围的原油被分解而形成分解圈，分解圈越大，说明该菌株降解能力越强。
（4）实验室灭菌有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌，实验操作要在酒精灯火焰附近的无菌区进行。
答案：（1）原油　选择　（2）平板划线法　稀释涂布平板法　（3）强　（4）干热灭菌　高压蒸汽灭菌　火焰

文章来源：http://m.jab88.com/j/7571.html

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